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重組6型腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的綠色熒光蛋白在野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠肺組織中的表達

樊勇; 郝燕捷; 高岱; 張卓莉 北京大學(xué)第一醫(yī)院風濕免疫科; 100034

摘要:目的探討重組6型腺相關(guān)病毒(r AAV6)介導(dǎo)的綠色熒光蛋白Zs Green在野百合堿誘導(dǎo)的動脈型肺動脈高壓(PAH)大鼠中的轉(zhuǎn)染效果及表達,為進一步利用此病毒載體進行PAH機制研究提供實驗依據(jù)。方法將24只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為正常對照組、PAH模型組和PAH病毒組,每組8只。PAH模型組和PAH病毒組大鼠頸背部皮下單次注射野百合堿60 mg/kg建立PAH模型,造模后1d PAH病毒組大鼠氣管內(nèi)注射100μl含1×1011vg r AAV6-Zs Green液,PAH模型組大鼠氣管內(nèi)注射等體積PBS,正常對照組大鼠頸背部皮下注射等體積生理鹽水,且氣管內(nèi)注射等體積PBS。造模3周后各組大鼠稱重,采用右心導(dǎo)管法檢測右室收縮壓(RVSP)和平均肺動脈壓(m PAP)。取大鼠新鮮肺組織制備冰凍切片,采用蘇木精伊紅染色檢查大鼠肺組織病理學(xué)改變并計算肺動脈中膜厚度(WT)百分比,采用免疫熒光法觀察大鼠肺組織中Zs Green熒光強度變化。收集游離心臟標本測定右心室肥厚指數(shù)(RVHI)。采用Western blot法檢測各組大鼠肺組織中Zs Green蛋白的表達。結(jié)果 PAH模型鼠體重明顯低于正常對照組,造模大鼠RVSP、m PAP、RVHI和WT百分比均明顯高于正常對照組大鼠,提示野百合堿誘導(dǎo)PAH大鼠造模成功。熒光顯微鏡下可見PAH病毒組大鼠肺組織中Zs Green平均熒光強度(A值)為33.471±5.147,明顯高于正常對照組的4.581±1.871和PAH模型組的4.167±1.249,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P〈0.05),并在肺組織中呈廣泛分布,包括肺血管內(nèi)中膜。Western blot檢測顯示,正常對照組、PAH模型組和PAH病毒組大鼠肺組織中Zs Green蛋白相對表達量(灰度值)分別為0.072±0.017、0.067±0.019和0.317±0.062,PAH病毒組大鼠組肺組織Zs Green蛋白相對表達量明顯高于正常對照組和PAH模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P〈0.05)。蘇木精伊紅染色顯示,PAH病毒組大鼠肺組織炎性細胞浸

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