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磷酸水解酶對大腸桿菌工程菌合成番茄紅素的影響

劉洋洋; 王天民; 郭佳慧; 張翀; 薛正蓮; 邢新會 安徽工程大學生物與化學工程學院; 安徽蕪湖241000; 清華大學化學工程系生物化工研究所; 北京100084; 清華大學合成與系統(tǒng)生物學中心; 北京100084

摘要：實驗以大腸桿菌DH1為宿主菌，在已有生產(chǎn)番茄紅素大腸桿菌工程初始菌株lyc001的基礎上，增加合成番茄紅素途徑中的關鍵基因crtEIB拷貝數(shù)；表征結果表明，相較于初始菌lyc001，番茄紅素產(chǎn)量提高了34％，并將此菌命名為lyc011．利用CRISPR干擾（CRISPR interference，CRISPRi）原理以及Golden-Gate組裝方法成功構建了可以靶向得到的57個磷酸水解酶基因的雙single guide RNA（sgRNA）的質(zhì)粒．將dCas9質(zhì)粒和sgRNA表達質(zhì)粒導入lyc011菌株中，通過下調(diào)這57個磷酸水解酶基因表達量，最終通過發(fā)酵表征成功篩選到了15個對番茄紅素產(chǎn)量提高具有正向調(diào)節(jié)結果的磷酸水解酶基因，分別為：yjjG，aphA，nagD，yqaB，yidA，pphA，bacA，glpQ，pgpB，spoT，cpdB，nudd，dgt，phoQ．

注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系安徽工程大學學報雜志社