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創(chuàng)傷弧菌溶細胞素特定氨基酸序列分析及其人源化單鏈抗體篩選

潘振; 呂鵬; 邵淑麗; 畢艷梅; 孫梅; 曲業(yè)敏; 陳英劍; 王明義; 胡成進 錦州醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院; 錦州121001; 江蘇大學(xué)生命科學(xué)研究院; 鎮(zhèn)江212013; 威海市立醫(yī)院中心實驗室; 威海264200; 濟南軍區(qū)總醫(yī)院實驗診斷科; 濟南250031

摘要：本研究利用生物信息學(xué)方法分析創(chuàng)傷弧菌（vibrio vulnificus, V.vulnificus）溶細胞素的蓖麻毒素結(jié)構(gòu)域內(nèi)氨基酸序列并合成多肽,篩選人工合成的單鏈抗體噬菌體文庫Tomlinson I＋J,為創(chuàng)傷弧菌感染的抗體阻斷治療研究奠定基礎(chǔ)。通過對未經(jīng)處理的大容量Tomlinson I＋J噬菌體文庫進行3輪特異性親和篩選,從中篩到特異性結(jié)合溶細胞素多肽的克隆,命名為scFv-D2,經(jīng)氨基酸序列分析驗證其含有完整的人源化抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)。將scFv-D2克隆轉(zhuǎn)化E.coli HB2151并誘導(dǎo)表達,用ELISA方法檢測其可溶性scFv片段與溶細胞素毒性多肽的結(jié)合活性。結(jié)果顯示從Tomlinson I＋J文庫成功篩選出一株具有結(jié)合活性的人源化噬菌體單鏈抗體,可用于創(chuàng)傷弧菌感染抗體阻斷治療策略的研究。

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