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實驗室快速檢測細(xì)胞株支原體污染的方法研究

張瑋 王明麗 安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室 合肥230032

摘要：目的建立快速可靠的實驗室檢測細(xì)胞株培養(yǎng)中支原體污染的方法。方法采用DNA熒光染色試劑對本實驗室11株細(xì)胞進行熒光染色觀察與分析；同時從常見污染細(xì)胞的支原體16SrRNA中選擇兩段高度保守的核酸序列，作為支原體引物，采用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）法對同一批細(xì)胞株進行檢測，并對兩種檢測結(jié)果進行比較。結(jié)果采用DNA熒光染色法檢出11株細(xì)胞中有2株細(xì)胞出現(xiàn)陽性，陽性率為18．2％；采用PCR方法檢測11株細(xì)胞，有4株細(xì)胞出現(xiàn)陽性，陽性率為36．4％。通過兩種方法比較可以發(fā)現(xiàn)：DNA熒光染色法檢測結(jié)果陽性的細(xì)胞株用PCR方法檢測結(jié)果也是陽性。結(jié)論上述兩種方法均能有效地檢出細(xì)胞株中的支原體污染，DNA熒光染色法雖較PCR法靈敏度低，但操作簡便易觀察；而PCR法成本較高，將兩種方法結(jié)合應(yīng)用，對DNA熒光染色法可疑陽性的標(biāo)本再進行PCR檢測，既提高陽性檢出率，又節(jié)約了成本。

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