大鼠尾腱細胞外基質制備方法及其用于肌腱損傷修復的前期研究
摘要：目的探究大鼠尾腱細胞外基質制備方法及其復合脂肪間充質干細胞構建微組織,為組織工程法修復肌腱損傷所需生物材料提供實驗基礎.方法取20只150~200gSD大鼠鼠尾作為實驗材料,分別抽取出大鼠尾腱,經PBS徹底清洗后反復凍融3次,然后經過1%SDS于室溫下處理24h,并用大量PBS清洗1周除去細胞殘渣,最后^60Co消毒備用.對制備的大鼠尾腱細胞外基質進行病理學染色,觀察細胞殘留情況.同時,檢測該來源的生物源性材料殘留α-Gal含量.此外,觀察制備的大鼠尾腱細胞外基質復合脂肪間充質干細胞對細胞增殖的影響.同時,用CCK-8試劑盒檢測該生物材料的細胞毒性.結果大體觀察可見,經脫細胞處理過的尾腱體積增大,呈乳白色勻漿狀.HE以及DAPI染色結果顯示,經脫細胞處理后的尾腱細胞核大量減少,細胞數量顯著降低,每個高倍鏡視野內細胞殘余量不大于5個.脫細胞尾腱殘留α-Gal含量與正常尾腱相比有統計學差異,脫細胞尾腱殘留DNA極少.復合脂肪間充質干細胞培養7d相比培養1d活細胞數量明顯增多.CCK-8毒性測試結果顯示這種脫細胞大鼠尾腱的生物相容性較好,沒有細胞毒性.結論經過脫細胞方法制備的大鼠尾腱細胞外基質可有效除去細胞成分,并且與脂肪間充質干細胞有較好的生物相容性,可作為一種生物材料用于肌腱損傷修復.
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