青稞幼苗期葉片中SBEⅡa基因的克隆及其表達分析
摘要：為進一步研究淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE)在青稞葉片淀粉代謝中的作用,以青稞品種喜馬拉雅2號和康青1號為材料,通過同源克隆技術分離SBEⅡa基因,并對分離得到的SBEⅡa基因進行生物信息學分析,同時利用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術和淀粉分支酶活性測定試劑盒分析了在高溫、低溫和鹽脅迫條件下SBEⅡa基因的表達情況和SBEⅡa蛋白酶活性的變化情況。結果表明,從喜馬拉雅2號和康青1號克隆得到的SBEⅡa基因ORF區為2466bp,編碼821個氨基酸。生物信息學分析表明,該基因編碼的蛋白質分子量為92.09kDa,預測等電點(pI)為5.4,是酸性蛋白;該蛋白酶的不穩定系數為38.03,屬于穩定蛋白;參試材料與大麥的親緣關系最近,與細江蘺的親緣關系最遠。qRT-PCR和蛋白酶活性測定結果表明,SBEⅡa基因在不同環境下表達水平和SBEⅡa蛋白酶活性變異具有高度的正相關性,在不同環境和不同材料之間沒有明顯差異。
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