下調Skp2表達抑制骨肉瘤U2OS細胞惡性表型的實驗
摘要：目的通過使用小干擾RNA(siRNA)降低骨肉瘤中S期激酶相關蛋白2(Skp2)的表達,探討Skp2對骨肉瘤惡性生物學行為的影響及其分子機制。方法轉染Skp2 siRNA敲低骨肉瘤U2OS細胞中Skp2的表達。通過RT-qPCR和Western blot法檢測細胞內Skp2的mRNA和蛋白表達水平,確定Skp2 siRNA的沉默效率。MTT法檢測細胞增殖情況,PI單染及Annexin V/PI雙染后用流式細胞儀檢測對骨肉瘤細胞周期及凋亡的影響。Transwell實驗和鈣黃綠素乙酰甲酯(Calcein-AM)染色檢測細胞的遷移和侵襲。Western blot檢測細胞內Skp2的下游基因p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表達變化。結果轉染Skp2 siRNA在U2OS細胞中獲得較高的敲除效率。Skp2表達下調抑制了骨肉瘤細胞的增殖,并且使細胞生長阻滯在G0/G1期,細胞的凋亡率明顯增加。抑制Skp2后U2OS細胞的侵襲和遷移能力明顯降低。U2OS細胞Skp2敲低后其下游調控分子p21、p27及E-cadherin的表達顯著升高,而p-Akt的表達則明顯減弱。結論 Skp2在骨肉瘤細胞中發揮癌基因的作用,通過調控其信號通路中p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表達影響細胞生長、周期、凋亡、侵襲和遷移能力等惡性生物學行為。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系腫瘤防治研究雜志社
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