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H5N8亞型流感病毒雙重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測方法的建立與評價(jià)

孫潔; 廖立珊; 于力; 吳紹精; 劉建利; 陶虹; 楊俊興; 曾少靈; 林彥星; 黃超華; 林慶燕; 秦智鋒 深圳海關(guān)原深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心; 廣東深圳518001; 深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院; 廣東深圳518000; 深圳海關(guān)原深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心; 廣東深圳518001

摘要：流感病毒變異迅速，為研究和建立一種針對H5N8亞型流感病毒核酸準(zhǔn)確靈敏的檢測方法，分別選擇H5N8亞型流感毒株序列相對保守的HA基因和NA基因作為H5N8亞型流感病毒檢測的靶序列，設(shè)計(jì)兩套特異性的引物和探針，選擇兩種不同的熒光標(biāo)記，建立基于TaqMan探針的雙重?zé)晒釸TPCR快速檢測H5N8亞型禽流感病毒檢測方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的H5N8亞型流感病毒real time RT-PCR檢測方法HA基因檢測的靈敏度為10^-5，NA基因檢測的靈敏度為10^-5，重復(fù)性好。特異性佳。結(jié)果表明：本研究建立的雙重?zé)晒舛縍T-PCR技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確地檢測H5N8亞型流感病毒，耗時(shí)短，可很快作出判定結(jié)果，適用于H5N8流感病毒的分子生物學(xué)檢測和監(jiān)測。對于控制流感流行，減少經(jīng)濟(jì)損失，最大限度保護(hù)社會(huì)人群健康具有很大意義。

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