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人源化IGF-Ⅰ基因的人工合成、重組與表達

李向茸; 王興隴; 李倩; 鄧盈盈; 梁浩勤; 周飚; 馮若飛 西北民族大學生物工程與技術國家民委重點實驗室; 甘肅蘭州730030; 甘肅省動物細胞工程技術研究中心; 甘肅蘭州730030; 西北民族大學生命科學與工程學院; 甘肅蘭州730030

摘要:為了實現(xiàn)人源化胰島素樣生長因子Ⅰ(human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因在大腸桿菌中的高效表達,了解IGF-Ⅰ基因結構與功能的關系,探索人工制備的hIGF-Ⅰ在臨床治療疾病上的應用,實驗參照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序列并進行密碼子優(yōu)化,然后人工合成這條基因并將克隆至pUC57載體上.構建重組表達載體pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,轉化大腸桿菌BL21菌株,進行不同誘導條件的優(yōu)化,SDS-PAGE電泳確定最佳誘導條件,并利用建立hIGF-Ⅰ的間接ELISA檢測方法分析表達產(chǎn)物活性.結果表明,獲得重組表達載體pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,并在大腸桿菌中實現(xiàn)與GST蛋白的融合可溶性表達.最佳誘導條件OD600值為0.8、IPTG濃度為0.5 mmol/L,表達蛋白的濃度為2.811 mg/mL,且產(chǎn)物具有抗原活性.說明人工制備的hIGF-Ⅰ與天然的hIGF-Ⅰ生物活性有部分相同,在基礎研究和藥物開發(fā)方面可作為替代物進行研究.

注: 保護知識產(chǎn)權,如需閱讀全文請聯(lián)系西北民族大學學報雜志社