利用雙重sgRNAs構建miR-223全基因敲除小鼠
摘要：目的 利用雙重sgRNAs構建miR-223全基因敲除小鼠。方法 針對miR-223基因設計雙重sgRNAs,將體外轉錄的sgRNAs和Cas9 mRNA共同顯微注射入C57BL/6小鼠受精卵細胞。小鼠出生后取其基因組DNA進行PCR擴增和測序以鑒定基因型,同時取小鼠肝臟研磨后提取總RNA,通過real-time PCR分析miR-223在肝臟中的表達。結果 設計了miR-223基因雙重sgRNAs并對其進行了體外轉錄,純化后顯微注射小鼠受精卵細胞獲得miR-223基因突變小鼠。測序結果表明突變小鼠有3種基因型,一種為6 bp的缺失突變,但未對miR-223序列產生影響;另外兩種為162 bp和168 bp的缺失突變,完全刪除miR-223前體和成熟區序列。與野生型相比,這兩種小鼠肝組織中幾乎不能檢測到miR-223的表達。結論 設計雙重sgRNAs并應用CRISPR/Cas9技術成功構建miR-223全基因敲除小鼠。
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