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口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)方法的建立

孫雨; 宋曉暉; 肖穎; 畢一鳴; 王睿男; 蔣菲; 張存瑞; 王旭; 楊林; 王傳彬 中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心; 北京102600; 重慶動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心; 重慶400000

摘要：為建立快速定量檢測(cè)羊血清中口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體的方法,本研究通過(guò)優(yōu)化抗原表達(dá)條件等步驟,在大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)中獲得了可溶性的3A-3B1-3B2融合蛋白,基于純化的可溶性融合蛋白建立了口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)試劑盒。該方法能夠檢測(cè)羊血清中的口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體,敏感性高,特異性強(qiáng),對(duì)其他相關(guān)的羊類病原無(wú)交叉反應(yīng),其組內(nèi)與組間變異系數(shù)分別低于10%和15%,具有良好的重復(fù)性。對(duì)300份臨床血清樣品進(jìn)行檢測(cè),同Procheck公司的口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體試劑盒進(jìn)行比較,陽(yáng)性樣品符合率為98%,陰性樣品符合率為92%,總符合率為95%。重復(fù)性試驗(yàn)組內(nèi)與組間變異系數(shù)均小于10%。口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)方法同傳統(tǒng)的ELISA方法相比,特異性相當(dāng)、敏感性更高,操作簡(jiǎn)單、快速,具有較高的應(yīng)用推廣價(jià)值。

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